發布:2023-09-18 05:17:00編輯:視頻君來源:視頻教程網
細胞周期至少有兩種做法,最常見的如下圖分析: 這個是BrdU和7-AAD方法檢測細胞周期。紅色的gate就是G1期,綠色的就是S期,橙色的就是G2/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和這個一樣分析 如果單用PI等DNA染料染色,需要專業軟件來分析計算了。 比如這個圖,是DNA染料單染,其中粉色部分是G1期,黃色部分是S期,綠色部分是G2/M期。中間的分布一般是通過FlowJo這樣的軟件計算自動生成的。
在細胞培養液中加入模擬核苷酸EdU (比較老的方法也可以用BrdU)。培養一小時 后,更換為正常的培養液繼續培養。模擬核苷酸可以像天然核苷酸一樣被細胞攝取并整合入新合成的DNA。 培養一段時間后(一般小于一個細胞周期),固定細胞。根據所使用模擬核苷酸的不同,使用不同的方法。EdU,改變緩沖液的pH值,就會發出熒光。而BrdU則需用熒光抗體識別,需要對細胞膜和核膜進行通透處理。 再加入PI對DNA染色。 在二維坐標圖上,橫坐標設為線性PI熒光強度,縱坐標設為模擬核苷酸的熒光強度(log)。 典型的圖就像下面一樣: G1, G2 和S期就按照圖中的劃分來做。G1期的細胞沒有新合成DNA,所以BrdU信號是陰性,而PI的信號位于1倍體期。S期是正在合成DNA,所以BrdU都是陽性。G2期是已經合成好了2倍的DNA,所以位于2倍體期,信號是G1期的一倍。這個圖中,G1 PI信號是300, G2就是600.