發布:2023-07-03 17:08:00編輯:視頻君來源:視頻教程網
LB培養基的配方如下:胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L;酵母提取物(Yeast extract) 5g/L;氯化鈉(NaCl) 10g/L另外根據經驗值用NaOH調節該培養基的pH,使其達到7.4(該pH適合目前使用最廣的原核表達菌種E.coli的生長) LB培養基是一種培養基的名稱,生化分子實驗中一般用該培養基來預培養菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.可分為液體培養基和固體培養基。
LB一般被解釋為Luria-Bertani培養基,其發明人為貝爾塔尼(Giuseppe Bertani),這個名字來源於英語的lysogeny broth,即溶菌肉湯。
LB培養基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化鈉(NaCl) 10g/L
瓊脂粉15g/L
一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。
LB固體培養基倒板
1.配制:100mlLB培養基加入1.5g瓊脂粉
2.抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養基置與55℃的水浴中,待培養基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過高導致抗生素失效,并充分搖勻。
3.倒板:一般10ml倒1個板子。培養基倒入培養皿后,打開蓋子,在紫外下照10-15分鐘。
4.保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個月內使用。
LB培養基,是微生物學實驗中最常用的培養基,用于培養大腸桿菌等細菌,其分為液態或是加入瓊脂制成的固態培養基。加入抗生素的 LB 培養基可用于篩選以大腸桿菌為宿主的克隆。
LB培養基的配制:
成分
胰蛋白胨(tryptone) 10g
酵母提取物(yeast extract) 5g
氯化鈉(NaCl) 10g
固體培養基另加 瓊脂粉 15-20g
加雙蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH(約0.2ml)調pH至7.2,121℃滅菌30min
配制方法
(1)稱量 分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于燒杯中。
(2)溶化 加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中,用玻棒攪拌,使藥品全部溶化。
(3)調pH 用1mol/L NaOH溶液調pH至7.2。
(4)定容 將溶液倒入量筒中,加水至所需體積。
(5)加瓊脂 加入所需量瓊脂,加熱融化,補足失水。
(6)分裝、加塞、包扎。
(7)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。
胰蛋白胨 又稱胰酪蛋白胨(Casein Tryptone)、胰酶消化酪蛋白胨(Pancreatic digest of casein),是一種優質蛋白胨,是以新鮮牛肉和牛骨經胰酶消化,濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等,可配制各種微生物培養基,用于細菌的培養、分離、增殖、鑒定,以及無菌試驗培養基、厭氧菌培養基等細菌生化特性試驗用培養基的配置。
參考:
http://baike.baidu.com/view/2277866.htm?fr=ala0_1
酵母提取物是酵母經破壁后將其中蛋白質、核酸、維生素等抽提,再經生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的淡黃色粉末。
它們的成分非常復雜,是天然物質,具體成分無法分析清楚的,不同批次的產品還有少許區別,因此一般用于配置天然培養基。
LB培養基是一種培養基的名稱,生化分子實驗中一般用該培養基來預培養菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.可分為液體培養基和固體培養基。
液態培養基
根據《分子克隆實驗指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養基,應該在950
ml去離子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl
10g
搖動容器直至溶質溶解.用5mol/LNaOH調pH至7.0.用去離子水定容至1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.
培養的菌種一般是經過改造的無法在外界環境單獨存活和擴增的工程菌.通過培養工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質粒,工程菌的有效擴增是生化分子實驗的基礎。
LB培養基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone)
10g/L
酵母提取物(Yeast
extract)
5g/L
氯化鈉(NaCl)
10g/L
另外根據經驗值用NaOH調節該培養基的pH,使其達到7.4(該pH適合目前使用最廣的原核表達菌種E.coli的生長)
固態培養基
LB固體培養基1L和液體一樣,加15g~20g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。
培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料,一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素。按所用原料不同,可分為兩類:應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配制的,稱為天然培養基;應用化學藥品配成并標明成分的,稱為合成培養基或綜合培養基。化學試劑中的培養基,大多為合成培養基。采用化學成分未知或不全知的天然有機營養物質配制而成的培養基。常用的天然有機營養物質有馬鈴薯、小麥、大豆粉、高粱粉、薯類、胡蘿卜、米糠、麩皮、各種秸稈、木屑、甘蔗渣、棉籽殼、豆腐渣、酒糟、禽畜糞等。天然培養基營養齊全,取材容易,價格低廉,配制方便,是培養菌種和栽培生產理想的培養基。但是由于同一天然物質的營養成分,常因產地、收集季節或品種的不同而異,故不適宜做精確的(如營養生理方面)科學實驗材料。配制天然培養基宜采用新鮮無毒變的材料,秸稈要切短,殼粒需粉碎。
普通肉湯培養基用于一般細菌培養、復壯、增菌等,也可用于消毒劑定性消毒效果測定的干粉培養基。 中海普通肉湯培養基是常用的基礎培養基,它可作為一些特殊培養基的基本成分,再根據某種微生物的特殊要求,在基礎培養基中添加所需營養物質。 基礎培養基:含有細菌生長繁殖所需的基本營養物質,可供大多數細菌生長。在牛肉浸液中加入適量的蛋白胨、氯化鈉,調節pH7.2~7.6,經滅菌處理后,即為基礎液體培養基;如再加入0.3%~0.5%的瓊脂,則為基礎半固體培養基;加入1%~2%的瓊脂,則為基礎固體培養基。
由人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養基質,在微生物學中稱為微生物培養基。由于各類微生物對營養基質的要求各不同,因此微生物培養基類型很多,不同培養基可根據實際需要,添加一些自身無法合成的化合物。
由于各類微生物對營養的要求不同及科學研究的目的或生產實踐的需要不同,因而培養基的種類很多。迄今為止,已有數千種不同的培養基。